در این پژوهش به بررسی تأثیر غلظت باکتری (چگالی نوری)، مدت زمان مایه زنی^[۶۱] ریزنمونه ها با باکتری و مدت زمان هم کشتی بر کارایی انتقال ژن پرداخته شد. همچنین آزمایش مقدماتی برای تعیین غلظت بهینه آنتی بیوتیک کانامیسین به عنوان ماده گزینشگر صورت گرفت. این پژوهش به صورت مشترک در بخش علوم باغبانی و پژوهشکده بیوتکنولوژی دانشکده کشاورزی دانشگاه شیراز در سال های ۱۳۸۵ تا ۱۳۸۷ انجام شد.

۴-۲-۱- آزمایش مقدماتی

۴-۲-۱-۱- گزینش با کانامیسین

برای گزینش با کانامیسین از غلظت های ۰، ۲۵، ۵۰، ۱۰۰، ۱۵۰ و ۲۰۰ میلی گرم در لیتر استفاده شد. نتایج در جدول ۳-۴ نشان داده شده است.
فشار گزینش^[۶۲] یکی از مهم ترین عوامل مؤثر بر کارآیی انتقال ژن می باشد. اگر فشار گزینش خیلی پایین باشد تعداد بیشتری گیاهان گریخته به علت غلظت های پایین مواد گزینشی باززایی می شوند. در مقابل، اگر فشار گزینش خیلی بالا باشد بافت ها یا یاخته های تراریخت به سبب مواد دفعی از یاخته های غیر تراریخت مرده یا در حال مرگ و نیز ایجاد مزاحمت در انتقال عناصر ضروری (zhang et al, 2004) توسط این بافت ها یا یاخته های در حال مرگ نمی توانند رشد کنند یا حتی می میرند.
مقاومت گیاه به مواد گزینشی بستگی زیادی به گونه گیاهی دارد (Firoozabady et al, 1995). حتی درون یک گونه گیاهی، تحمل می تواند بسته به نژادگان متغیر باشد. به این منظور ارزیابی آستانه مواد گزینشی برای کشتن یاخته، بافت یا گیاه غیر تراریخت باید آزمایش شود. در این پژوهش بدون آلودگی باکتریایی، تشکیل پینه به وسیله کانامیسین در غلظت های آزمایش شده برای رقم ’Panamera‘زیر تأثیر قرار نگرفت در حالی که برای رقم’Rendz-Vous‘ تشکیل پینه به طور کامل زمانی که غلظت کانامیسین به بالاتر از ۱۰۰ میلی گرم در لیتر رسید جلوگیری شد.
جدول ۳-۴- اندام زایی از ریزنمونه های برگ دو رقم میخک روی محیط دارای کانامیسین با و بدون آلودگی توسط Agrobacterium tumefaciens LBA 4404.

تعداد شاخساره باززایی شده به ازای هر ریزنمونه
تشکیل شاخساره (%)
تشکیل پینه (%)
کانامیسین (mg l^-1)

با آلودگی با کتریایی

شاهد

با آلودگی با کتریایی

شاهد

با آلودگی با کتریایی

شاهد

’رندز-ووس‘

۳/۴

۱/۳

۵/۳± ۴/۱۴

۳/۶±۳/۳۱

۱۰۰

۱۰۰

۰