برای شبیه سازی مرحله هضم روده ای، ۴۵/۱ میلی لیتر از شیره روده شبیه سازی شده (SIF) شامل پانکراتین، اینورتاز و آمیلوگلوکوزیداز با نسبت آنزیم به نشاسته (بر حسب وزن خشک) به ترتیب ۳/۱ به ۱۰۰، ۱/۱ به ۱۰۰۰ و ۱ به ۱۰۰۰ (وزنی/وزنی) به لوله های فالکون اضافه گردید. مرحله هضم روده ای برای ۱۲۰ دقیقه ادامه یافت در حالتی که مخلوط های بدست آمده در pH، ۰۵/۰±۸/۶ و در دمای ۳۷ درجه سانتیگراد با سرعت ۶۰ دور در دقیقه همزده شدند.

( اینجا فقط تکه ای از متن پایان نامه درج شده است. برای خرید متن کامل فایل پایان نامه با فرمت ورد می توانید به سایت feko.ir مراجعه نمایید و کلمه کلیدی مورد نظرتان را جستجو نمایید. )

مقادیر یکسانی (۵/۰ میلی لیتر) از نمونه های در حال هضم در شرایط معده شبیه سازی شده در دقایق ۰، ۵، ۱۰، ۱۵، ۲۰، ۳۰ و ۴۰ و از نمونه های درحال هضم در شرایط روده شبیه سازی شده در دقایق ۱، ۲، ۵، ۱۰، ۱۵، ۲۰، ۳۰، ۴۵، ۶۰، ۸۰، ۹۰، ۱۰۰ و ۱۲۰ جدا شدند و برای آزمون تعیین میزان قند های احیا کننده آماده گردیدند.

۳-۱۶٫ تعیین میزان گلوکز رهایش یافته

برای جلوگیری از هیدرولیز آنزیمی بیشتر، مقادیر جدا شده از نمونه ها در زمان های ذکر شده به سرعت با ۵/۲ میلی لیتر اتانول مخلوط شدند. این مخلوط برای ۳۰ دقیقه در دمای اتاق (۱±۲۴ درجه سانتیگراد) نگهداری شد. سپس برای اینکه تمام قندهای تولیدی در اثر هیدرولیز نشاسته ها به گلوکز تبدیل گردند، ۱/۰ میلی لیتر از مخلوط ها جدا شد و در دمای ۳۷ درجه سانتیگراد (در اینکوباتور) برای ۱۰ دقیقه با ترکیبی از آنزیم های اینورتاز و آمیلوگلوکوزیداز که در بافر استات با pH 2/5 قرار داشتند (۱ میلی گرم آمیلوگلوکوزیداز و ۴/۰ میلی گرم اینورتاز به ازای هر ۱۰ میلی لیتر بافر) مخلوط گردید. در انتها میزان قند گلوکز با بهره گرفتن از روش ۳،۵-دی نیتروسالسیلیک اسید اندازه گیری شد و به صورت میلی گرم گلوکز بر ۱۰۰ میلی لیتر از مخلوط هضم شده گزارش گردید.

۳-۱۷٫ تعیین میزان قند به روش ۳،۵- دی نیتروسالسیلیک اسید

بر اساس این روش ابتدا دو محلول زیر تهیه شدند:
۱- ۴۵ گرم سدیم پتاسیم تارتارات در ۷۵ میلی لیتر آب مقطر حل گردید.
۲- ۵/۱ گرم ۳،۵- دی نیتروسالسیلیک اسید در ۳۰ میلی لیتر محلول ۲ مولار سود سوزآور حل شد.
سپس دو محلول ذکر شده ی ۱و ۲ با هم مخلوط شدند و حجم نهایی به وسیله آب مقطر به ۱۵۰ میلی لیتر رسانیده شد. این محلول نهایی تهیه شده (از مخلوط ۱ و ۲) را معرف ۳،۵-دی نیتروسالسیلیک اسید می نامند. سپس ۲۵۰ میلی گرم گلوکز در آب مقطر حل گردید و حجم نهایی آن به ۱۰۰ میلی لیتر رسانیده شد. ۱۰ میلی لیتر از این محلول برداشته شد و حجم نهایی آن به ۱۰۰ میلی لیتر رسانیده شد. محلول هایی به حجم های ۰ تا ۲ میلی لیتر از این محلول به وسیله پیپت برداشته شد و به وسیله آب مقطر حجم تمام آن ها به ۲ میلی لیتر رسید. در ادامه ۱ میلی لیتر از معرف ۳،۵-دی نیتروسالسیلیک اسید به تیوب های حاوی محلول گلوکز اضافه گردید و به خوبی همزده شد و برای جلوگیری از خروج آب در اثر تبخیر تمام تیوب ها درگذاری شدند. سپس تیوب های حاوی محلول ها به مدت ۱۰ دقیقه در آب در حال جوش (دمای ۱۰۰ درجه سانتیگراد) حرارت دهی شدند. پس از این مرحله تیوب ها تا رسیدن به دمای اتاق سرد شدند و جذب آن ها در طول موج ۵۴۰ نانومتر در برابر نمونه شاهد ثبت گردید.
شکل ۳-۱ نمودار استاندارد بدست آمده بر اساس روش اندازه گیری قند های احیای ۳،۵-دی نیتروسالسیلیک اسید را نشان می دهد.

شکل ۳-۱٫ منحنی استاندارد غلظت گلوکز در برابر جذب خوانده شده در طول موج ۵۴۰ نانومتر

۳-۱۸٫ تعیین خصوصیات جریان

۳-۱۸-۱٫ تعیین خصوصیات جریان نمونه های نشاسته قبل از مراحل هضم

اندازه گیری های رئولوژیکی به وسیله یک ویسکومتر چرخشی (Bohlin Model Visco 88, Bohlin Instruments, UK) و اسپیندل شماره C25 و C30 انجام شد. رفتار جریان پایای نمونه های ژل تهیه شده از نشاسته های طبیعی، فسفریله و هیدروکسی پروپیله گندم در دو غلظت ۸ و ۱۲ درصد و در دمای ۳۷ درجه سانتیگراد، با مد کنترل-کرنش[۴۶] در دامنه کرنش ۲۰ تا ۲۲۰ معکوس ثانیه تعیین شد و داده های تنش برشی در مقابل کرنش جمع آوری گردید.

۳-۱۸-۲٫ تعیین خصوصیات جریان نمونه های نشاسته در شرایط حضور بزاق

۳-۱۸-۲-۱٫ خصوصیات جریان مستقل از زمان

برای این منظور ۲ میلی لیتر از بزاق تازه ی آماده شده برای نمونه ای ژل نشاسته های مورد آزمایش در دمای اتاق (۱±۲۴ درجه سانتیگراد) ریخته شد و نمونه ها سریعاً جهت آزمون رئولوژیکی مستقل از زمان با دستگاه ویسکومتر ذکر شده در دامنه کرنش ۲۰ تا ۲۲۰ معکوس ثانیه تست شدند.

۳-۱۸-۲-۲٫ خصوصیات جریان وابسته به زمان

برای تعیین خصوصیات جریان وابسته به زمان، نمونه های نشاسته در کرنش ۵۰ معکوس ثانیه (کرنش فرض شده مطابق با کرنش اعمالی در دهان انسان توسط وود (۱۹۶۸) در دمای ۳۷ درجه سانتیگراد تحت برش قرار گرفتند و تنش برشی و ویسکوزیته آن ها به عنوان تابعی از زمان برش (طی ۳۲۰ ثانیه) تا رسیدن به حالت تعادلی مورد بررسی قرار گرفتند.

۳-۱۸-۳٫ بررسی اثر PH اسیدی بر خصوصیات جریان

برای این منظور، خصوصیات جریان نمونه های ژل نشاسته ها (غلظت ۸ درصد و حجم ۵/۷ میلی لیتر) پس از طی مرحله هضم در شرایط معده شبیه سازی شده (پس از ۴۰ دقیقه هضم)، با وجود و بدون وجود pH اسیدی (۰۵/۰±۲/۱) و در دامنه کرنش ۲۰ تا ۲۲۰ معکوس ثانیه مورد بررسی قرار گرفت.

۳-۱۸-۴٫ بررسی اثر آنزیم های رودوی بر خصوصیات جریان

برای این منظور، خصوصیات جریان نمونه های ژل نشاسته ها (غلظت ۸ درصد و حجم ۵/۷ میلی لیتر) پس از طی مرحله هضم در شرایط روده شبیه سازی شده (پس از ۱۲۰ دقیقه هضم)، در شرایط حضور و عدم حضور آنزیم های رودوی و در دامنه کرنش ۲۰ تا ۲۲۰ معکوس ثانیه مورد بررسی قرار گرفت.

۳-۱۹٫ مدلسازی رئولوژیکی

۳-۱۹-۱٫ مدل های رئولوژیکی مستقل از زمان

به فراخور نیاز از مدل های رئولوژیکی مستقل از زمان ذیل برای بیان رفتار جریان نمونه های نشاسته استفاده گردید: (رائو، ۲۰۰۷؛ رضوی و همکاران، ۲۰۱۱)
مدل توانی[۴۷]
۳-۱۰
که در این معادله kp ضریب قوام پاورلا (Pa.sn) و np شاخص رفتار جریان پاورلا می باشد.
مدل بینگهام[۴۸]
۳-۱۱
که در این معادله ویسکوزیته پلاستیک بینگهام (Pa.s) و تنش تسلیم بینگهام (Pa) می باشد.
۳- مدل هرشل-بالکلی[۴۹]
۳-۱۲
که در آن تنش تسلیم (Pa)، ضریب قوام (Pa.sn) و شاخص رفتار جریان هرشل-بالکلی می باشد.
مدل سیسکو[۵۰]
۳-۱۳

که در این معادله ویسکوزیته ظاهری (Pa.s)، ضریب قوام سیسکو (Pa.sn) و ns و (Pa.s) به ترتیب شاخص جریان سیسکو و ویسکوزیته ظاهری در تنش برشی بی نهایت می باشند.

۳-۱۹-۲٫ مدل های رئولوژیکی وابسته به زمان

از مدل های رئولوژیکی وابسته به زمان زیر برای بیان خصوصیات جریان وابسته به زمان نمونه های نشاسته استفاده گردید: (کوچکی و رضوی، ۲۰۰۹)
مدل مرتبه دوم کنتیک ساختاری[۵۱]
۳-۱۴
که در این معادله و به ترتیب ویسکوزیته ظاهری و نهایی (Pa.s) نمونه ها بوده و k ثابت سرعت شکست تیکسوتروپ و n درجه شکست می باشد.
۲- مدل مرتبه اول شکست تنش با مقدار تنش غیر صفر[۵۲]
۳-۱۵

موضوعات: بدون موضوع  لینک ثابت


فرم در حال بارگذاری ...